CTAB法提取DNA

CTAB法提取DNA:

1.一部分DNA提取缓冲液冰浴;

2.将1.5%(w/v)CTAB加入另一部分DNA提取缓冲液充分溶解至提取液完全 透明，于65“C左右加入1%琉基乙醇混匀;

3.取39样品在研钵中加入液氮研磨;

4.取 20ML冰浴的DNA提取缓冲液加入到研磨好的样品，混匀，上下颠倒2 min;4000印m，4oC，离心 15min;弃上清液;

5.将 20mlCTAB提取液加入离心管，混匀后放入 65OC水浴60一 90min，隔 30，nin取出上下轻轻颠倒几次;

6.水浴后，加入 15ml氯仿:异戊醇(24:l)，上下晃动 10min以上，4000印m 常温离心巧min，吸取上清液至另一新 50ml离心管中;

7.重复步骤6;

8.加入巧ml冷冻的异丙醇，轻轻颠倒数次，混匀后一20“C冰冻 30min沉淀 DNA;

9.4000甲m离心 10min，弃上清液，加入 5ml76%乙醇(含 10mMN玩Ac)浸 泡过夜(中途换2一3次乙醇);

10.8000甲m离心 5min，弃乙醇风干沉淀约半小时，每管加入 3mlTE和20林l 20、，g/ml洲aseA， 37OC温浴过夜; 11.将溶液转入一 10ml离心管，加入 3ml苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:l) 充分颠倒混匀， 4000rpm离心巧min，吸上清液于另一 10ml离心管中;

12.加入 1ml5MNaCI和 3ml水饱和乙醚，充分混匀，4000甲m离心 10min; 13.弃乙醚，用20闪枪头挡住离心管管口内侧，用力下压枪头，使枪头与管 壁间形成一狭缝，使下清液从缝中流入另一 10ml离心管;

14.加入 15ml冷冻的异丙醇，轻轻颠倒数次，混匀后一 20OC冰冻 30min，4000 rpm离心10min，弃上清液，加入3m170%乙醇浸泡过夜(中途换2一3次乙醇)